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    Dev Cell:中科大单革教授课题组对秀丽线虫转录调控研究突破进展

    摘要 : 2017年10月12日,国际著名学术杂志《Cell》子刊《Developmental Cell》杂志在线发表了中国科技大学生命学院单革教授实验室的一篇研究文章,论文报导了秀丽线虫转录调控研究的研究成果。

    亚美娱乐app www.yynm360.com 2017年10月12日,国际著名学术杂志《Cell》子刊《Developmental Cell》杂志在线发表了中国科技大学生命学院单革教授实验室的一篇研究文章,论文报导了秀丽线虫转录调控研究的研究成果。研究组发现秀丽线虫中两个高度保守的转录因子UNC-30和UNC-55,共调控包括cAMP通路、microRNA和lncRNA等在内的数以千计的靶基因的表达,从而调控D型运动神经元的发育和分化。文章的第一作者是博士生余斌,单革教授为论文通讯作者。

    为了获知这两个转录因子在D型运动神经元中的所有靶基因,该实验室首先利用CRISPR-Cas9技术将GFP分别插入到unc-30和unc-55基因的3’末端,得到表达UNC-30::GFP和UNC-55::GFP融合蛋白的秀丽线虫,再对利用所获秀丽线虫进行ChIP(染色质免疫共沉淀)实验。通过对原有ChIP实验方法进行改进和优化,克服了两个转录因子秀丽线虫中表达量小,表达时间窗口短,表达的D型神经元细胞占秀丽线虫细胞比例少(约占2%)等限制性瓶颈,成功的完成了ChIP实验、拿到了可供高通量测序(ChIP-seq)的DNA样品。这也是第一次实现了在多细胞动物中原位表达水平转录因子的ChIP-seq实验。

    研究揭示这两个转录因子各自均调控近2000多个基因的表达,而且非常有意思的是,它们共同调控1300多个编码和非编码基因的表达。这些靶基因在多个对神经元发育和可塑性具有重要调控作用的信号通路中行使功能。其中一个通路是决定环腺苷酸(cAMP)浓度的cAMP代谢通路。为了直接观测活体秀丽线虫细胞中的cAMP浓度变化,作者开创性地将用于哺乳动物细胞中检测cAMP水平的探针改造为在活体秀丽线虫中也可以使用工具。进一步的研究揭示这两个在动物界高度保守的转录因子通过调节神经元中的基因表达,调控了细胞中cAMP的浓度,进而在时间上影响D型运动神经元发育和可塑性的进程。另外,从全基因组水平上获得了UNC-30和UNC-55调控的靶基因,为进一步探索动物细胞中转录因子调控网络提供了重要的基础。

    原文链接:

    Convergent Transcriptional Programs Regulate cAMP Levels in C. elegansGABAergic Motor Neurons

    原文摘要:

    Both transcriptional regulation and signaling pathways play crucial roles in neuronal differentiation and plasticity. Caenorhabditis elegans possesses 19 GABAergic motor neurons (MNs) called D MNs, which are divided into two subgroups: DD and VD. DD, but not VD, MNs reverse their cellular polarity in a developmental process called respecification. UNC-30 and UNC-55 are two critical transcription factors in D MNs. By using chromatin immunoprecipitation with CRISPR/Cas9 knockin of GFP fusion, we uncovered the global targets of UNC-30 and UNC-55. UNC-30 and UNC-55 are largely converged to regulate over 1,300 noncoding and coding genes, and genes in multiple biological processes, including cAMP metabolism, are co-regulated. Increase in cAMP levels may serve as a timing signal for respecification, wheras UNC-55 regulates genes such as pde-4 to keep the cAMP levels low in VD. Other genes modulating DD respecification such as lin-14, irx-1, and oig-1 are also found to affect cAMP levels.

    来源: Developmental Cell 浏览次数:0

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